CCK-8檢測實驗（細(xì)胞活力檢測實驗）是一種常用的細(xì)胞增殖和毒性檢測方法，通過測量細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化，從而來評估細(xì)胞的活力。CCK-8檢測是一種簡便、快速、高靈敏度的細(xì)胞活力檢測方法，適用于多種細(xì)胞類型和實驗條件。本文主要從實驗原理、實驗步驟、注意事項等方面來介紹該實驗。

一、實驗原理

該試劑中含有WST-8，它在電子載體（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚染料formazan，生成的甲瓚物formazan的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，因此可以用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

活力計算:

細(xì)胞活力＊(%）=[A(加藥)—A（空白）]/［A（0加藥）—A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白):具有培養(yǎng)基和CCK8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度

A（0加藥）:具有細(xì)胞、CCK8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力。

二、實驗步驟

1. 實驗前將細(xì)胞接種96孔板，每組鋪5個平行孔（孔的外圍一圈加PBS，以防邊緣效應(yīng)影響實驗組），在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時。

2. 進(jìn)行CCK-8實驗，棄掉孔內(nèi)原有培養(yǎng)基并每孔加入新配制的含有終體積1/10 CCK-8試劑盒的完quan培養(yǎng)基，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4hr（根據(jù)細(xì)胞量決定時間長短，細(xì)胞越多OD值越大且隨著孵育時間的延長OD值也會變大，最適OD值應(yīng)保持在2以內(nèi)）。

3. 在450nm處測定吸光值。

4. 計算細(xì)胞增殖率：（實驗組OD-空白組OD）/（對照組OD-空白組OD）

三、注意事項

1. 細(xì)胞接種密度要適中，過低或過高的密度都會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2. CCK-8試劑的添加量要適量，過多或過少都會影響實驗結(jié)果。

3. 培養(yǎng)時間要適當(dāng)，過長或過短的培養(yǎng)時間都可能導(dǎo)致實驗結(jié)果的偏差。

4. 測定吸光度時，要確保酶標(biāo)儀的校準(zhǔn)準(zhǔn)確，以獲得可靠的實驗數(shù)據(jù)。

5.如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

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