分析型流式細(xì)胞儀檢測原理

將待測樣品制成單細(xì)胞懸液，在鞘液的包裹下進入流式細(xì)胞儀內(nèi)的檢測區(qū)域，細(xì)胞在激光的照射下會發(fā)生散射和折射，產(chǎn)生的散射光信號和熒光信號由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的強度與細(xì)胞直徑成正相關(guān)，可以理解為細(xì)胞直徑越大，F(xiàn)SC越強，細(xì)胞直徑越小，F(xiàn)SC越弱。所以可以利用細(xì)胞的FSC值初步比較細(xì)胞的大小，利用FSC值對細(xì)胞進行分群和分類。  

側(cè)向角散射光（SSC）的強度與細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度成正相關(guān)（與細(xì)胞中所含的細(xì)胞器、細(xì)胞核等的數(shù)量成正比），可以理解為細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，SSC越強；細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)越簡單，SSC越弱。所以可以利用細(xì)胞的SSC值初步比較細(xì)胞的顆粒度，利用SSC值對細(xì)胞進行分群和分類。

當(dāng)細(xì)胞通過激光束時，檢測器會檢測到細(xì)胞或顆粒的散射光，放置在前面的檢測器檢測FSC值，而放置在側(cè)面的多個檢測器檢測SSC值。通過綜合分析前向散射FSC和側(cè)向散射SSC的數(shù)據(jù)，便能根據(jù)細(xì)胞大小、形狀和復(fù)雜度將其進行分群分類。由于樣品細(xì)胞不需要標(biāo)記任何熒光化合物偶聯(lián)抗體，直接上樣分析得到FSC值和SSC值，其值代表細(xì)胞的大小和顆粒度兩個物理特征，所以FSC-SSC散點圖又稱為 “物理圖"。

分選型流式細(xì)胞儀檢測原理

當(dāng)細(xì)胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細(xì)胞的分離。流式細(xì)胞儀除了根據(jù)FSC和SCC散射度或熒光(如DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特異抗原) 散射度差異來分離細(xì)胞外，更多的采用細(xì)胞表面抗原標(biāo)記的熒光強度差異來分離細(xì)胞。每種細(xì)胞表面具有du te的抗原，當(dāng)形態(tài)學(xué)檢測難以區(qū)別時，免疫表型參數(shù)對細(xì)胞分選有決定性作用。

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果

熒光信號和散射光信號通過波長選擇的濾光片，由相應(yīng)的光電管和電子檢測器接收并轉(zhuǎn)換成電信號，經(jīng)放大器放大后送入計算機并進行分析顯示和結(jié)果輸出，測定的結(jié)果常用流式直方圖、流式散點圖、流式密度圖和流式等高線圖來表示。

流式細(xì)胞術(shù)樣本類型

流式細(xì)胞儀可檢測多種樣本：外周血、骨髓、細(xì)胞穿刺液、洗脫液、實體組織、培養(yǎng)細(xì)胞、微生物。

流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用

1.流式細(xì)胞術(shù)可以用來檢測細(xì)胞表面以及胞內(nèi)的各種標(biāo)志，對細(xì)胞進行分群鑒定以及各種蛋白表達量高低的比較。

2.通過標(biāo)記Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相關(guān)基因，流式細(xì)胞術(shù)可用來檢測細(xì)胞的增殖以及凋亡。

3.流式細(xì)胞術(shù)可用來分析細(xì)胞周期。細(xì)胞核DNA含量隨著細(xì)胞增殖周期時相的不同而發(fā)生變化，用DNA染料進行染色，DNA含量多，熒光信號強，DNA含量少，熒光強度低。

4.在腫瘤學(xué)研究中尤其常用，流式細(xì)胞術(shù)可以用于判斷藥物對腫瘤細(xì)胞影響、腫瘤的生長速度等。